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Chemicall根癌(熱激)感受態(tài)細胞

簡要描述:LBA4404 Chemically Competent Cell/ Chemicall根癌(熱激)感受態(tài)細胞
保存條件:-80℃

  • 產(chǎn)品型號:LBA4404
  • 產(chǎn)品品牌:Abnbio
  • 更新時間:2024-03-27
  • 訪  問  量:449

詳細介紹

品牌Abnbio貨號ABN508-100
規(guī)格100支100ul供貨周期現(xiàn)貨
主要用途細胞培養(yǎng)應用領域化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥

LBA4404 Chemically Competent Cell  根癌(熱激)感受態(tài)細胞

基因型:

Ach5 (rif R) Ti pAL4404 (strepR) Octop

簡要說明:

o LBA4404菌株為Ach5型背景,核基因中含有篩選標簽——li福平抗性基因rif,為了便于轉化操作,此菌株攜帶一無自身轉運功能的章魚堿型Ti質粒pAL4404,此質粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件,pAL4404質粒自身的T-DNA轉移功能被破壞,但可以幫助轉入的雙元載體TDNA順利轉移)。pAL4404型Ti質粒含有篩選標簽:strep,賦予LBA4404菌株lian霉素抗性,適用于菸草、番茄、煙草等植物的轉基因操作,經(jīng)pCAMBIA2301質粒檢測轉化效率可達104cfu/μg。

操作說明:

1.取-80℃保存的農桿菌感受態(tài)于冰上待其部分融化,處于冰水混合狀態(tài)時插入冰中。

2.每100μl感受態(tài)加1ug(體積不大于10ul)質粒DNA,用手bo打管底混勻,依次于冰上靜置5分鐘、液氮5分鐘、28℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。

3.加入700μl無抗生素的LB或YEB液體培養(yǎng)基,于28℃振蕩培養(yǎng)2~3小時。

4.6000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的LB或YEB平板上,倒置放于28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)2-3天(當平板只含有50ug/ml kan 時,28℃培養(yǎng)48h即可;平板中同時加入50ug/ml kan,20ug/ml rif 時,需28℃培養(yǎng)60h;如果使用的平板含有50ug/ml rif 則需要28℃培養(yǎng)72-90h)。

注意事項:

1.加入質粒時體積不應大于感受態(tài)體積的1/10 ;質粒不純或存在乙醇等有機物污染,轉化效率急劇下降;質粒增大一倍,轉化效率下降一個數(shù)量級。

2.混入質粒時應輕柔操作。

3.轉化高濃度的質??上鄳獪p少最終用于涂板的菌量。

4.LI福平濃度不應高于25ug/ul,過高的LI福平濃度不利于農桿菌生長,會降低其生長速度和轉化效率。本公司感受態(tài)計算轉化效率時所用平板只含有50ug/ml kan,若所用平板含有20ug/ml rif則轉化效率降低到1/2。

5.培養(yǎng)基中加入LI福平的目的是防止雜菌生長、篩選農桿菌;根據(jù)所用菌株抗性加入LIAN霉素或QING大霉素可防止Ti質粒丟失,但LIAN霉素不利于農桿菌的轉基因操作,所以一般培養(yǎng)農桿菌時不考慮LIAN霉素或QING大霉素,Ti質粒丟失的概率極低(可以忽略)。












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